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    ELISA試劑盒分析蛋白質定量的新方法

    發(fā)布時間: 2018-07-09  點擊次數(shù): 1997次

    ELISA試劑盒生物學研討離不開定量。關于肯定定量,一般需要使用已知濃度的分子制作規(guī)范曲線。近來,研討人員介紹了一種新辦法,能使用串聯(lián)質譜儀對多個蛋白質進行肯定定量。
    在MARQUIS辦法中,關于每個待定量的肽段,研討人員建立重同位素符號的肽段。他們以不一樣的量混合這些肽段,并在安排或細胞裂解后立即將一種混合物參加每個生物樣品中。研討小組的負責人以為:“這是關鍵的一步。你要盡早參加這些肽段,這么重同位素符號肽段和內源肽段的丟失可一起發(fā)生。
    ELISA試劑盒隨后以同位素試劑符號樣品,并參加質譜儀中。每個肽段發(fā)生兩個峰:“重”峰代表組成的(加標)肽段,而“輕”峰代表內源性蛋白。經過定量前者碎片化所發(fā)生的符號離子,研討人員能發(fā)生每個肽段的規(guī)范曲線。以后他們能測定對應內源性肽段的信號,斷定樣品中存在多少分子。
    研討小組使用MARQUIS定量了EGFR信號通路中的酪氨酸磷酸化。在幾種配體影響以后,他們在多個時刻點定量了EGFR網絡內的磷酸化動力學,完成了EGFR磷酸化位點的定量對比,并證明了關于每種配體,受體磷酸化在性質上類似,但數(shù)量上不一樣。他們還培養(yǎng)了膠質母細胞瘤異種移植物,并使用這種辦法定量了EGFR激酶按捺的效果。
    據(jù)ELISA試劑盒介紹,MARQUIS能一起定量10個樣品中多達100種肽段。這只需要一臺串聯(lián)質譜儀(如三重四級桿)、市售的同位素符號試劑,以及重同位素符號的組成肽段。每個人都能完成。咱們期望創(chuàng)建出一種適當簡略的辦法,而不需要什么竅門。

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