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    ELISA試劑盒基礎(chǔ)知識培訓

    發(fā)布時間: 2014-07-11  點擊次數(shù): 948次

    大家在做ELISA試劑盒實驗的過程中,難免會遇到各種不同的問題,比如標準曲線不好,試劑盒的回收率,假陰性,假陽性,實驗的重復(fù)性不好等等?,F(xiàn)在專業(yè)人士就來一一解答用戶們在實驗過程中遇到的各種疑問!
    曲線問題: 
    1.OD值不正常
    試劑盒未回溫,試劑盒回溫到25℃
    溫度控制不好,控制正確溫度
    孵育時間不準確,控制孵育時間
    洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增 加,洗滌4-5次,每孔250ul,然后拍干
    陽光直射,對著風直接吹,避風避
    酶標儀的波長錯誤,酶標儀的波長450nm
    抗體的稀釋錯誤,正確的稀釋抗體
    水質(zhì)問題,用娃哈哈礦泉水代替
    2.白   板
    洗滌液配制錯誤,正確的配制洗滌液
    少加液體(錯加液體),正確的步驟加液體
    3.無 梯 度
    標準品也污染,換標準品點板
    OD值不正常,控制溫度時間在做一次
    人為點板,不要點板
    4.線 性 不 好
    OD值不正常,控制溫度時間在做一次
    回收率
    1.空白管陽性高
    樣本本身就是陽性樣本,換陰性樣本做回收率
    空白管在實驗中被污染,實驗中防止交叉污染
    水質(zhì)原因用,娃哈哈礦泉水代替
    2.偏  高
    添加量不準確,的添加量
    添加濃度不適合,添加合適的濃度
    取液吹干量多,準確的取液吹干
    取到其它相層液體,取需用相吹干
    復(fù)溶液未稀釋或加入量少,正確的稀釋復(fù)溶液
    3.偏  低
    添加量不準確,的添加量
    添加濃度不適合,添加合適的濃度
    取液吹干量少,準確的取液吹干
    復(fù)溶液稀釋錯誤或加入量多,正確的稀釋復(fù)溶液
    假陰、陽性
    1,水質(zhì)原因:點復(fù)溶液驗證,用娃哈哈礦泉水代替
    2,實驗操作原因
    吸取到其它相吹干,準確的取液吹干
    離心不*,延長離心時間
    樣本的污染,更換樣本
    乳化未處理*,溫浴(70℃)處理乳化現(xiàn)象
    3,儀器試劑原因
    離心管未清洗干凈,正確的洗滌器具
    有機溶劑的影響,做試劑空白看影響結(jié)果
    4,衍生化試劑原因(長時間衍生化試劑變質(zhì)),更換衍生化試劑
    5,與曲線好壞相關(guān),,保證曲線的正常。

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